Extraction d'ADN génomique de plante au Sucrose

Ce protocole, supposé très rapide et utilisable en plaques 96 puits a été fournit par Adrien Sicard et n'a pas encore été testé sur tomate ni fraisier. Prudence donc...

Matériel de départ :

• Pistons de broyage ou système de broyage par plaques.
• Un seul tube eppendorf par échantillon (ou une plaque).
• Une centrifugeuse pour tubes eppendorf ou pour plaques 96 puits.
• Un bain-marie (ou une étuve) réglé à 60°C.

 

Solutions nécessaires :

• Solution de sucrose : Tris pH7.5 50mM, NaCl 300mM, Sucrose 300mM soit 5ml de Tris 1M, 10ml de NaCl 3M, 10.27g de Sucrose pour 100ml de solution.
• Eau DNAse-free

 

Mode opératoire :

1. Récupérer un peu de tissu de plante dans un tube eppendorf ou dans un puits de plaque 96 puits.
2. Ajouter 300µl de solution de sucrose.
3. Broyer au piston ou dans un broyage à plaques.
4. Centrifuger 30s à 3000rpm.
5. Incuber à 60°C pendant 1 heure.
6. Enlever 220µl de la solution de sucrose.
7. Ajouter 500µl d'eau DNAse-free.
8. Utiliser 5µl par réaction de PCR.