Southern blot

    - Transfert par Southern blot: après électrophorèse, le gel est immergé pendant 15 min dans une solution d’HCl 0,125 N (étape de dépurination), puis immergé 30 min dans la solution de dénaturation (comme ci-dessus) et enfin neutralisé 30 min dans la solution de neutralisation. Après un lavage de 10 min dans un bain de SSC 10X, les fragments d’ADN sont transférés sur une membrane de nylon Hybond N+ dans du tampon SSC 10X pendant 16 h à température ambiante.

    - Transfert à sec pour les RT-PCR semi quantitative: le gel est immergé pendant 20 min dans une solution dénaturante de NaOH 0,5 M et NaCl 1,5 M sous agitation douce. Puis le gel est neutralisé pendant 20 min dans une solution de Tris 1 M pH 7.4 et NaCl 1,5 M. Enfin, le gel est lavé 15 min dans une solution SSC 2X (SSC 1X : NaCl 150 mM, citrate de sodium 15 mM). Le transfert de l’ADN sur membrane de nylon (Hybond N+, Amersham) est réalisé pendant 16 h à température ambiante.