Principe :

Protocole qui fonctionne très bien pour le Tabac, qu'on utilise pour la Tomate mais qui, dans ce dernier cas, n'est pas satisfaisant (taux de germination faible et beaucoup de tubes polliniques éclatés...). Faute de mieux...

Hygiène et sécurité :

Les déchets organiques issus de plantes transgéniques ou de mutants sont jetés dans la poubelle Biohazard.

Matériel nécessaire :

• Boîtes de pétri de 50 mm.
• Pinces fines nettoyées avec un papier absorbant imbibé d'alcool entre chaque plante.
• Microscope inversé.
•  (Optionnel) Compteur

Réactifs :

• Solution de germination : Acide Borique 3.75 ppm, Sucrose 5 % soit, pour 50 ml, 50 µl de solution-mère d'acide borique 1000 X, 2.5 g de sucrose et de l'eau déminéralisée. Ajuster le pH à 5.7 avec du KOH.
• Solution-mère d'Acide Borique : 3750 ppm soit 188 mg pour 50 ml d'eau mQ. (1 ppm = 1 mg/kg, 3750 ppm = 3750 mg/kg ou ~3750 mg/L dans de l'eau. Pour 50 ml, ça donne 187.5 mg soit ~188 mg)

Mode opératoire :

1. Verser 1mL de tampon dans une boite de pétri 50mm.
2. Prélever une fleur entière.
3. Avec une pince, éventrer les étamines pour faire tomber le pollen dans le tampon.
4. Laisser germer 4h à l’obscurité et à température de la serre (pour ne pas créer de choc thermique en les transportant jusqu'au laboratoire).
5. Une fois les 4h écoulées, amener les boites de pétri et observer la germination grâce à un microscope inversé.

Remarques :

• Toujours faire la comparaison avec une plante sauvage.
• Le tube pollinique peut sortir du grain de pollen et éclater : ces cas sont comptabilisés dans les grains de pollen germés.
• Penser à faire jouer la mollette de focalisation car les grains de pollen sont répartis sur toute l’épaisseur du liquide.
• Compter environ 200 grains de pollen pour chaque fleur et environ 1000 à 2000 pour déterminer le % de germination des grains de pollen d’une plante.
• Le pollen de tomate, dans ces conditions, est censé donner un % de germination d’environ 40-50 % (max atteint 80%).

Références