Loading...
 

Extraction d'ADN génomique d'Arabidopsis (Edwards)

    L’ADN génomique d’Arabidopsis est extrait selon la méthode modifiée d’Edwards et al. (1991).

    Une feuille d’Arabidopsis est broyée quelques secondes avec un micro-pilon (Sigma Z35994-7) dans un tube Eppendorf. Puis 200 μL de tampon d’extraction sont ajoutés (Tris-HCl 0,2 M pH 7.5, NaCl 0,25 M, EDTA 25 mM et SDS 0,5% (p/v)) et homogénéisés par broyage pour quelques secondes supplémentaires. L’échantillon est centrifugé pendant 4 min à 17000 g à température ambiante.

    190 μL de surnageant sont prélevés et mélangés à 190 μL d’isopropanol dans un nouveau tube en vortexant pendant 5 secondes. Le mélange est laissé pendant 5 min à température ambiante puis centrifugé pendant 5 min à 17000 g. Le culot d’ADN séché à l’air est repris dans 90 μL d’eau et soumis à une déprotéinisation par extraction au phénol-chloroforme (1:1) suivie d’une extraction au chloroforme-alcool isoamylique (24:1).

    2 μL d’ADN génomique sont ensuite utilisés comme matrice pour réaliser les expériences de PCR.