Matériel de départ :

 

• 
          Au moins un piston de broyage (idéalement un par échantillon mais on peut nettoyer soigneusement entre chaque broyage).
      
• 
          Centrifugeuse pour tubes eppendorfs pas nécessairement réfrigérée, réglée sur la vitesse maximale.
      
• 
          3 tubes eppendorf de 1.5ml par échantillon.

 

          Solutions nécessaires :

 

• 
          Tampon d’Extraction :Tris pH8 0.2M, NaCl 0.25M, EDTA 25mM et SDS 0.5% (p/v) (soit, pour 10ml de tampon, 2ml de Tris 1M, 833µl de NaCl 3M, 500µl d’EDTA 0.5M et 500µl de SDS 10% (0.002€/échantillon), eau DNAse-free qsp 10ml). Stocker à température ambiante.
      
• 
          Isopropanol (0.0096€/échantillon)
      
• 
          Ethanol 70%

 

          Mode opératoire :

 

1. 
           Couper un petit morceau de feuille (ou autre tissu) en utilisant, par exemple, un tube eppendorf comme emporte-pièce et collecter dans un tube eppendorf de 1,5 ml.
       
2. 
           Broyer soigneusement dans 300 µl de Tampon d’Extraction (volume à vérifier).
       
3. 
           Vortexer quelques secondes et centrifuger 5 min pour sédimenter les débris. Récupérer 200 µl du surnageant dans un tube eppendorf neuf.
       
4. 
           Ajouter 200 µl d’Isopropanol. Homogénéiser et centrifuger 10 min.
       
5. 
           Effectuer le lavage en ajoutant au culot 400 µl d’Ethanol 70%, centrifuger 5 min et éliminer soigneusement le surnageant.
       
6. 
           Sécher le culot 5 min au speedvac et resuspendre dans 100 µl d'eau DNAse-free en homogénéisant un maximum.
       
7. 
           Centrifuger 5 min et récupérer le surnageant dans un tube neuf. Stocker à -80°C.