Pour l’extraction et la manipulation des ARN, toutes les solutions sont traitées avec 0,1% (v/v) de DEPC, un inhibiteur des ribonucléases, ou préparées avec de l’eau traitée au DEPC. Tout le matériel est nettoyé au chloroforme, séché à l’éthanol et autoclavé.

    L’extraction d’ARN totaux est réalisée selon la méthode de Verwoerd et al. (1989) adaptée par Chevalier et al. (1995). Le matériel végétal est broyé dans un mortier en présence d’azote liquide. Le tampon d’extraction [Phénol] : (LiCl 100 mM, EDTA 10 mM pH 8, Tris-HCl 100 mM pH 8, SDS 1%), 1:1 est chauffé à 80°C avant d’être ajouté à la poudre congelée (3 mL de tampon par gramme de poudre). Le mélange est homogénéisé au polytron pendant 2 min à vitesse croissante. Les débris cellulaires sont sédimentés par centrifugation pendant 20 min à 15000 g. La phase aqueuse est récupérée et soumise à deux extractions au chloroforme-alcool isoamylique (24:1). Les ARN sont ensuite précipités sélectivement pendant 4 h à 4°C en présence de LiCl 2 M. Le culot obtenu après centrifugation est repris dans 300 μL d’eau. Les ARN sont alors précipités à l’éthanol 95% (2,5 volume) à -20°C, en présence d’acetate sodium 0,3 M pH 5.8 (0,1 volume, (0.012€/ml)). Le culot final est repris dans de l’eau traitée au DEPC.