Principe :

    blabla

    

 

       Hygiène et sécurité :

    Rien à signaler

    

 

        Matériel nécessaire :

 

• 
          Centrifugeuse réfrigérée
      
• 
          Vortex
      
• 
          Speedvac

 

         Réactifs :

 

• 
          acetate sodium 3M à pH 5.2 (0.012€/ml)
      
• 
          Ethanol 95-96%
      
• 
          Ethanol 70%
      
• 
          Eau DNAse-free ou Tampon TE

 

        Mode opératoire :

 

          Précipitation

 

1. 
           Ajouter 1/10ème de volume d'acétate de sodium à la solution contenant l'acide nucléique d'intérêt (exemple : 10µl d'acétate pour 100µl de solution). Vortexer.
       
2. 
           Ajouter de l'éthanol de façon à arriver à une concentration finale de ~70% en ajoutant 2.5 volumes d'éthanol 95-96% (exemple : 275µl d'éthanol pour 100µl de solution initiale ou pour 110µl de solution additionnée d'acétate). Vortexer.
       
3. 
           Centrifuger au moins 15min à vitesse maximale. Eliminer le surnageant.

 

          Lavage

 

1. 
           Laver en ajoutant de l'éthanol 70% en quantité suffisante pour atteindre le volume final solution d'ADN + acétate + éthanol 95% (exemple : ~400-500µl pour 100µl de solution). Vortexer.
       
2. 
           Centrifuger au moins 5min à vitesse maximale. Eliminer soigneusement le surnageant (le culot peut être mobile).
       
3. 
           Sécher 5min au speedvac.
       
4. 
           Ajouter de l'eau DNAse-free (pour faciliter le dosage au spectrophotomètre, les réactions enzymatiques comme le séquençage ou la transformation par électroporation) ou du tampon TE (pour faciliter la reprise du culot, améliorer la stabilité de l'ADN et/ou stocker à 4°C sur la durée).

 

         Références :

    blabla