Les bactéries E.coli XL1-Blue sont étalées sur un milieu LB solide supplémenté en tétracycline 25 μg.mL-1 et incubées pendant une nuit à 37°C.

    Une colonie est alors prélevée et utilisée pour ensemencer 10 mL de milieu LB.

    La préculture est soumise à agitation (200 rpm) pendant une nuit à 37°C.

    200 mL de milieu LB sont ensemencés avec 2 mL de la préculture, et plaçés sous agitation à 37°C jusqu’à l’obtention d’une DO600 nm de 0,5.

    Remarque importante : Toutes les étapes ultérieures sont réalisées à 4°C afin d’éviter les chocs thermiques.

    Une série de cycles de centrifugation-remise en suspension du culot de bactéries sont ensuite réalisés, en utilisant une solution de glycérol 10% (v/v) avec des volumes de solution décroissants : 60 mL, 20 mL, 10 mL, 400 μL.

    Les 400 μL de bactéries sont ensuite aliquotés et immédiatement congelés dans l’azote liquide.

    Les bactéries sont conservées à -80°C.