Protocole couramment utilisé pour repropager des plasmides, ce qui ne nécessite pas une efficacité maximale.
Hygiène et sécurité :
Les tubes et pointes de pipettes souillées par les bactéries doivent être jetées dans la poubelle Biohazard.
Matériel nécessaire :
- Bain marie à 42 °C
- Etuve à 37 °C
Réactifs :
- CaCl2 100 mM stérile (autoclavé ou par filtration).
- Plasmide.
- Bactéries compétentes (indifféremment électrocompétentes ou chimiocompétentes).
- Boites de pétri avec du LB agar additionné d'antibiotiques (en fonction du plasmide et de la souche bactérienne utilisés).
Mode opératoire :
- Mélanger doucement 1 µl de plasmide dans 4 µl de bactéries compétentes dans un microtube stérile.
- Ajouter 15 µl de CaCl2 et mélanger doucement. Refroidir dans de la glace.
- Mettre au bain-marie pendant 45 secondes.
- Refroidir dans de la glace.
- Etaler sur milieu sélectif et incuber à 37 °C