NB : 1ml de Trizol pour max 100mg d’échantillon

    

    

    1) Ajouter 1ml de Trizol aux échantillons

    

    2) Mixer 2x40s au Ribolyser (FastPrep)

    

    3) Centrifuger 10min à 12000g, à 4°C

    

    4) Récupérer le surnageant dans un nouveau tube (stérile)

    

    5) Incuber les échantillons 5 min à température ambiante

    

    6) Ajouter 200µl de chloroforme

    

    7) Agiter les tubes à la main 15s

    

    8) Incuber 2 à 3 min à température ambiante

    

    9) Centrifuger les tubes à 12000g pendant 10min, à 4°C

    

    10) Transférer la phase aqueuse dans un nouveau tube (environ 600µl)

    

    11) Ajouter 500µl d’isopropanol

    

    12) Agiter les tubes

    

    13) Incuber les tubes pendant 10min à température ambiante

    

    14) Centrifuger les tubes à 12000g pendant 10min, à 4°C

    

    15) Eliminer le surnageant

    

    16) Laver le culot avec 1ml d’éthanol 75%

    

    17) Vortexer

    

    18) Centrifuger à 7500g pendant 5min, à 4°C

    

    19) Sécher partiellement le culot par vacuum, sans centrifuger (5-10min)

    

    20) Resuspendre les ARN avec 40µl d’H2O RNase-free (ou H2O-DEPC)

    

    21) Incuber à 55°C pendant 10min pour faciliter la resuspension