Les ARN totaux sont traités au préalable à la DNAse RQ1 (Promega) pendant 30 min à 37°C. L’enzyme est éliminée par extraction au phénol-chloroforme. Les ARN sont ensuite précipités dans l’éthanol 95% en présence d’acetate sodium 0,3 M pH 5.8 avant d’être repris dans de l’eau DEPC.

Les ARN sont dénaturés à température ambiante pendant 10 min en présence de 10 mM de HMM? (Hydroxy Méthyl Mercurate), puis incubés pendant 5 min à température ambiante en présence de DTT 15 mM. La réaction de transcription inverse est effectuée à 42°C pendant 60 min dans le tampon « First Strand buffer 5X, Invitrogen », en présence de 10 pmoles d’oligonucléotides (oligo-dT), de 500 μM de chaque dNTP, de 40 U de RNasin (Promega) et de 100 U de SuperScript™ II RNase H- Reverse Transcriptase (Invitrogen). L’enzyme est ensuite dénaturée pendant 10 min à 70°C.

Une fraction de la transcription inverse est utilisée en PCR pour amplifier le fragment souhaité.