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Transformation de bactéries par électroporation

    La transformation s’effectue par électroporation en utilisant le MicroPulser™ (Bio-Rad).



    Les bactéries compétentes (40 μL) sont décongelées dans la glace puis mélangées à 1µl de plasmide obtenu par recombinaison ou ligation, ce plasmide portant une résistance à un antibiotique.



    Le mélange est placé dans une cuve à électroporation (électrodes distantes de 0,2 cm).



    Le générateur est réglé pour délivrer un pulse de 1800 Volt en quelques millisecondes.



    Après l’impulsion électrique, les bactéries sont immédiatement transférées dans 1 mL de milieu LB ou de milieu SOC et soumises à une agitation pendant 1 h à 37°C.



    Une fraction de la culture est étalée sur un milieu LB supplémenté en antibiotique approprié, et, suivant le vecteur utilisé, le milieu LB est sélectif par la présence d’un inducteur de la β-galactosidase, l’IPTG (200 mg.mL-1) et d’un substrat coloré, le X-Gal5% (p/v).